分光光度分析就是根據物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜,反映了分子中某些基團的信息??梢杂脴藴使鈭D譜再結合其它手段進(jìn)行定性分析。
實(shí)驗證明,不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同,這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度,以確定選擇哪一種溶劑。
實(shí)驗室選擇時(shí)需要根據自己實(shí)驗室的需要和目的用途來(lái)考慮,光學(xué)構造和光源、探測方法、樣品類(lèi)型和數據處理等都是要考慮的因素。
光學(xué)構造
一般來(lái)說(shuō),紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類(lèi)。顧名思義,單光束型主要是依賴(lài)單束光進(jìn)行測量。一束給定波長(cháng)的光通過(guò)對照物,然后再通過(guò)實(shí)際樣品溶液,就能得到吸光結果。
雙光束型則是通過(guò)一個(gè)斬光輪將一束光分成兩束,分別測量對照樣品和實(shí)際樣品??梢孕』馄坪蜏p少測量時(shí)間。一些雙光型光度計不利用斬光輪,而是利用一種光束分光器來(lái)代替,將一束光分成兩束平行的光然后同時(shí)測量對照樣品和目的樣品。因為增加了測量的速度,所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處。
光源和檢測方法
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個(gè)重要因素。實(shí)驗室研究人員希望省錢(qián)購入專(zhuān)門(mén)儀器定量核酸、蛋白或者細菌的生長(cháng)情況。
分光光度計的帶寬很大程度上依賴(lài)于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧?shí)驗要求的光譜。一種嚴格帶寬使得儀器能對復雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿(mǎn)足多種實(shí)驗需要。
為了測量吸光值,分光光度計制造商通常使用光電倍增管和光敏二極管。PMTs提供快速的反應時(shí)間和良好的靈敏度,并且可以在紫外光譜調節至特定的范圍。但一些制造商依賴(lài)于光敏二極管的動(dòng)態(tài)范圍在數秒內行使所有的光譜測量。
樣品類(lèi)型
在大部分的樣品類(lèi)型中,分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿(mǎn)足高通量的需要和大規模的實(shí)驗室需求。但盡管對于小實(shí)驗室來(lái)說(shuō),制造商仍然提供了多種容器轉換器來(lái)滿(mǎn)足通量的要求和減少實(shí)驗時(shí)間。
用小試管cuvette裝樣品容量一般從1 μl-5ml,并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來(lái)滿(mǎn)足各種改變需要。體現了柔韌性。
數據管理
大部分單機型的分光光度計包含了驅動(dòng)儀器運行和管理數據的軟件。高性能的儀器,通常與PC機一起聯(lián)用,需要從制造商提供額外的軟件。同時(shí)用戶(hù)也可以選擇升級軟件以滿(mǎn)足他們的需要。
另外一個(gè)值得考慮的因素是數據的終使用。各獨立實(shí)驗室都有各自感興趣的實(shí)驗結果。